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婴幼儿奶粉中5种核苷酸分析报告

案例来源:博纳艾杰尔

核苷酸是生命遗传物质RNA的基本组成单位,是体内合成核酸的前身物。婴幼儿正处在快速生长发育阶段,身体对核苷酸的需求量超过体内合成核苷酸的能力,但母乳可为婴幼儿提供所需核苷酸。而对于没有母乳喂养的婴幼儿,食用含足量核苷酸的配方奶粉,不仅可提高免疫力,也可保护婴幼儿肠胃健康。

样品名称

中文同义名

英文简称

结构式

分子式

分子量

CAS号

胞嘧啶核苷酸

胞苷酸

CMP


C9H14N3O8P

323.2

63-37-6

次黄嘌呤核苷酸

N/A

IMP


C10H13N4O8P

348.21

131-99-7

腺嘌呤核苷酸

腺苷酸

AMP


C10H14N5O7P

347.22

61-19-8

尿嘧啶核苷酸

尿苷酸

UMP


C9H13N2O9P

324.18

58-97-9

鸟嘌呤核苷酸

鸟苷酸

GMP


C10H14N5O8P

363.22

85-32-5



实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

高效液相色谱仪,紫外检测器;

试剂材料

屈臣氏水;甲醇为色谱纯;磷酸二氢钾色谱纯;磷酸、四丁基硫酸氢铵为分析纯;

胞嘧啶核苷酸(胞苷酸)、腺嘌呤核苷酸(腺苷酸)、尿嘧啶核苷酸(尿苷酸)、次黄嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸(鸟苷酸)标准品;

高效液相色谱柱:Venusil ® C18 Plus;5μm,120Å,4.6×250mm

 

样品制备

5种核苷酸混合标准溶液:分别称取核苷酸标准品CMP、AMP、UMP各10mg、GMP、IMP各5mg(精确至0.1mg),用水溶解成并定容至100mL,混匀,即得;

某品牌婴幼儿奶粉样品溶液:称取5.0g奶粉样品,用20mL热水(50~60℃)充分溶解试样,冷却至室温;用10%乙酸溶液调节pH至4.1,移至50mL容量瓶中,定容,滤纸过滤,所得滤液用0.45μm滤膜过滤,即得样品溶液。

 

色谱条件

色谱柱:

Venusil ® C18 Plus;5μm,120Å,4.6×250mm;

流动相:

称取1.360g磷酸二氢钾,加0.4753g四丁基硫酸氢铵至1000mL容量瓶中,用水补齐至刻度,准确加2.5ml磷酸和40mL甲醇,混匀后超声10min。(备注:由于流动相中含离子对试剂,色谱柱需要先用流动相平衡至少90min后,再运行4针标准品,系统才能稳定)

波长:254nm;

柱温:30℃;

流速:1.0mL/min;

进样量:10µL。

 

结果与讨论

本实验按照GB5413.40-2016婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定中方法,使用Venusil® C18 Plus色谱柱对5种核苷酸混合标准溶液、婴幼儿奶粉样品溶液进行检测,由以下结果可知,婴幼儿奶粉样品中五种核苷酸与杂质的分离度大于1.5,回收率97%~109%,满足实验需求。

 表2.5种核苷酸实验数据

样品名称

化合物名称

保留时间/min

理论塔板数

分离度

拖尾因子

备注

5种核苷酸混标

CMP

3.660

15803

0.98

图1

AMP

5.608

16882

13.46

0.97

GMP

11.061

18806

21.99

0.96

UMP

21.226

21178

22.40

0.98

IMP

26.011

20584

7.30

0.99



图1.Venusil ® C18 Plus色谱柱5种核苷酸混标高效液相色谱图

 表3.某品牌婴幼儿奶粉5种核苷酸实验数据

化合物名称

保留时间/min

分离度

拖尾因子

备注

CMP

3.659

0.99

图2

杂质1

4.342

5.73

-

AMP

5.605

8.48

0.94

杂质2

6.081

2.74

-

GMP

11.051

18.91

0.97

杂质3

19.841

20.47

-

UMP

21.223

2.57

0.95

IMP

26.015

7.30

0.99


图2.Venusil® C18 Plus色谱柱婴幼儿奶粉样品溶液高效液相色谱图


表4.某品牌婴幼儿奶粉5种核苷酸加标实验结果

化合物名称

保留时间/min

加标浓度(ug/mL)

回收率(%)

备注

CMP

3.660

12.2

108.4

图3

AMP

5.605

7.6

101.8

GMP

11.050

9.2

97.7

UMP

21.213

14.8

106.3

IMP

26.028

11

101.9




图3.Venusil ®C18 Plus色谱柱婴幼儿奶粉样品加标溶液高效液相色谱图

结论

本实验按照GB5413.40-2016婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定中方法,使用Venusil® C18 Plus色谱柱对5种核苷酸混合标准溶液、婴幼儿奶粉样品溶液进行检测,结果表明在上述实验条件下,Venusil®C18 Plus色谱柱可用于婴幼儿奶粉中5种核苷酸的分析检测。


相关标准品

样品名称化合物名称保留时间/min理论塔板数分离度拖尾因子备注
5种核苷酸混标CMP3.66158030.981
AMP5.6081688213.460.97
GMP11.0611880621.990.96
UMP21.2262117822.40.98
IMP26.011205847.30.99

其他耗材

产品名称

订货号

规格描述

包装数量

Venusil ®C18 Plus

VPS952505-A

5µm,120Å;4.6×250mm

1支

1.5mL样品瓶

1109-0519

短螺纹透明带书写处

100/PK

32×11.6mm

1.5mL样品瓶盖

0915-1819

9mm中心孔蓝盖,红色橡胶/米色PTFE隔垫

100/PK

45 ShoreÅ;1.0mm

微孔滤膜

AS021345-T

单膜,13mm,0.45µm

100个/包

一次性注射器

LZSQ-2ML

2mL无针头

100支/包



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