动物源性食品中喹诺酮类药物残留LC-MS/MS分析方法
背景
喹诺酮类（Quinolones, QNs）是人工合成的一类抗菌药物，因其具有抗菌谱广、高效、低毒、组织穿透力强、价格低廉等特点，已成为食品动物饲养和水产养殖中最重要的抗感染药物之一，但由于细菌对喹诺酮类药物耐药性的产生和某些喹诺酮类药物的潜在致癌作用，其残留问题已引起广泛关注。
2003 年我国的鳗鱼产品就曾因氟喹诺酮类药物残留问题出口日本受阻。目前，包括我国在内的许多国家和地区都对喹诺酮类药物的使用范围和最大残留限量做出规定。欧盟规定动物肌肉等组织中恩诺沙星等的MRLs 为0.01 ～ 1.9 mg/kg；美国禁止在水产养殖业中使用QNs；日本对进口生鳗鱼及其制品的环丙沙星等残留限量控制在检测限的0.05 mg/kg。中华人民共和国农业部公告第2292 号，自2016 年12 月31 日起，停止经营、使用用于食品动物的洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星4 种原料药的各种盐、酯及其各种制剂。本文根据《GB/T20366-2006 动物源产品中喹诺酮类残留量的测定液相色谱- 串联质谱法》，采用PerkinElmer QSight LCMSMS 建立动物源食品中喹诺酮类药物残留的解决方案。
样品前处理方法
提取
称取5.0 g 试样，置于50 mL 聚四氟乙烯离心管中，加入20 mL 甲酸- 乙腈溶液（1:49），均质1 min，以4000 r/min 离心5 min。上清液移入另一个50 mL聚四氟乙烯离心管中。将离心残渣用20mL 甲酸- 乙腈溶液再提取一次，合并上清液。
净化
将上清液转移至125 mL 分液漏斗中，加入25 mL乙腈饱和的正己烷，振摇2 min，将下层溶液转移至100 mL 棕色鸡心瓶中，于40 ℃水浴中旋蒸至近干，氮吹至干。准确加入1.0 mL 甲酸- 乙腈溶液溶解残渣，涡流混匀后，过滤至样品瓶中，供LC-MS/MS 测定。
LC-MS/MS 方法
液相色谱参数
色谱柱：Brownlee SPP C18，100 mm*2.1 mm，2.7μm （货号：N9308404）
柱温：35 ℃
流动相：A：乙腈，B：水（含0.1 % 甲酸，2.0 mM 乙酸铵）
流速：0.4 mL/min
运行时间：10 min
梯度洗脱：洗脱程序见表1：
质谱参数
以下参数以PerkinElmerQSight 200 系列为例，喹诺酮类化合物质谱参数见表2。
离子源质谱参数：
离子源模式：电喷雾离子源，正离子模式（ESI+）
反吹气：75
雾化气：220
离子源温度：450 ℃
离子源喷雾电压：5000 V
实验结果
各组分的色谱图如图1 所示，各个化合物均获得良好的色谱分离
十六种喹诺酮类化合物的标准曲线线性见表3，氟甲喹标准工作曲线的浓度梯度为：0.001，0.002，0.005，0.1，0.2，0.5，1，2，5，10 ng/mL。图2 为氟甲喹的标准曲线图。
其余喹诺酮目标化合物的标准曲线在0.01-50 ng/mL，依次为0.01，0.02，0.05，0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0，50.0 ng/mL。其中，诺氟沙星和环丙沙星为0.05-50 ng/mL，萘啶酸和氟甲喹为0.001-10 ng/mL。标准曲线范围内具有良好的线性（R2> 0.994）；采用鱼肉基质作为加标样品，平行6 个样品测试方法的回收率和方法重现性，详细结果请见表4。从表4 可以看到，在加标浓度为2 ng/mL 下，回收率为92.25-105.87 %，方法重现性为1.53-4.78%。最低定量限为0.0002-0.01μg/kg，完全符合残留检测要求。
结论
本方法完全满足对GB/T 20366-2006 动物源产品中喹诺酮类残留量的检测要求（标准里的最低限量为1.0μg/kg），适用于喹诺酮及其类似物的日常检测。PerkinElmerQSight 210TM 系统完全满足动物源产品中喹诺酮类残留量的日常检测工作。该质谱系统离子源具有自清洁功能以及质谱接口HSID 热源去溶剂技术，提高仪器抗污染能力，从而获得更低的噪音，更低的检测限，从容应对复杂基质的食品安全检测。
参考文献
1. GB/T 20366-2006 动物源产品中喹诺酮类残留量的测定 液相色谱- 串联质谱法
色谱柱及标准品订购信息
PerkinElmer SPP 系列色谱柱订购信息：色谱柱采购直线：
021-60645658，021-60645659
电子邮件：consumable.china@perkinelmer.com。
标准品订购信息：
1ST9243-100M | 16 种喹诺酮类混标溶液，100ppm |
组分 | |
产品号 | 中文 | 英文 | CAS# | MF |
1ST4100 | 达氟沙星 | Danofloxacin | 112398-08-0 | C19H20FN3O3 |
1ST4107 | 恩诺沙星 | Enrofloxacin | 93106-60-6 | C19H22FN3O3 |
1ST5703 | 环丙沙星 | Ciprofloxacin | 85721-33-1 | C17H18FN3O3 |
1ST5714 | 依诺沙星 | Enoxacin | 74011-58-8 | C15H17FN4O3 |
1ST5719 | 氟罗沙星 | Fleroxacin | 79660-72-3 | C17H18F3N3O3 |
1ST5735 | 萘啶酸 | Nalidixic acid | 389-08-2 | C12H12N2O3 |
1ST5738 | 诺氟沙星 | Norfloxacin | 70458-96-7 | C16H18FN3O3 |
1ST5740 | 氧氟沙星 | Ofloxacin | 82419-36-1 | C18H20FN3O4 |
1ST5743 | 奥比沙星 | Orbifloxacin | 113617-63-3 | C19H20F3N3O3 |
1ST5745 | 恶喹酸 | Oxolinic acid | 14698-29-4 | C13H11NO5 |
1ST5753 | 司帕沙星 | Sparfloxacin | 110871-86-8 | C19H22F2N4O3 |
1ST5756 | 培氟沙星 | Pefloxacin | 70458-92-3 | C17H20FN3O3 |
1ST5757 | 沙拉沙星 | Sarafloxacin | 98105-99-8 | C20H17F2N3O3 |
1ST5758 | 双氟沙星 | Difloxacin | 98106-17-3 | C21H19F2N3O3 |
1ST5761 | 氟甲喹 | Flumequine | 42835-25-6 | C14H12FNO3 |
1ST5759 | 洛美沙星 | Lomefloxacin | 98079-51-7 | C17H19F2N3O3 |
