来源：SCIEX

此方法所需样品由阿尔塔科技提供：

注：可以按照客户需求，定制特定品种、特定浓度、特定溶剂的混标。

我国是世界上蜂王浆的主要产地，也是蜂王浆的出口大国和消费大国。现代医学证明，蜂王浆是理想的天然保健品。

蜂王浆（royal jelly），又名蜂皇浆、蜂皇乳、蜂王乳、蜂乳，是蜜蜂巢中培育幼虫的青年工蜂咽头腺的分泌物，是供给将要变成蜂王的幼虫的食物，也是蜂王终身的食物。所谓蜂王浆就是青壮年蜜蜂食用花粉后分泌的一种乳状物，此乳状物就像哺乳动物的乳汁并且极具营养价值和免疫功能而且含有极高的长寿因子，蜜蜂和蜂王在卵期是一样的，孵化后吃三天蜂王浆以后改为吃蜂蜜和花粉的长成蜜蜂，孵化后一直食用蜂王浆的长成蜂王，蜜蜂的寿限在一至六个月而蜂王因一直食用蜂王浆一般能活五到七年。蜂王浆的颜色是根据蜜蜂食用花粉的不同而稍有改变一般分为乳白色和微黄色。

四环素类（Tetracyclines,TCs）是由链霉菌产生的一类广谱抗生素，在食品工业中常被广泛应用于预防和治疗动物疾病。在蜂王浆生产期，给产浆群蜜蜂以治疗剂量饲喂四环素，会造成蜂王浆中四环素残留。由国家质量监督检验检疫总局发布的《蜂王浆中土霉素，四环素，金霉素，强力霉素的残留量测定》（GB/T 23409-2009）标准对蜂王浆中四环素类抗生素的液相色谱-质谱/质谱测定方法以及残留量进行了规定。

本实验依据GB/T23409-2009建立蜂王浆中四环素类药物的液相色谱质谱检测方法，外标法已经能够满足检测要求并且简单方便，所以本实验采用外标法定量，并对此方法可行性进行了验证。

样品的前处理

称取2.0 g（精确到0.001 g）样品，置于50 mL离心管中，加入15 mL 1%的三氯乙酸溶液，1000 rpm涡旋混合1min，于6500 rpm离心5 min，取上清液10 mL，用1 mol/L Na2HPO4调节PH值为6-7，将溶液通过SPE小柱，待样液完全流出后，依次用5 mL水和5 mL 5%甲醇水溶液淋洗，弃去全部流出液。减压抽干小柱5 min，最后用5mL甲醇洗脱。用1 mL甲醇水（3:7, v/v）溶液溶解残渣，过0.45μm滤膜，洗脱液用低于40℃氮气吹干，待测。

液相条件

ExionLC™ AD是一款具有可扩展性、耐用性、超低交叉污染能力的液相色谱系统；其性能可满足最苛刻的液相色谱方法开发要求，而且使得样品分析应用变得更加简单。该液相色谱系统秉承了SCIEX公司40多年的LC-MS新技术和服务体系。

•在3种不同清冼进样针模式下，都能达到几乎零交叉污染水平

•每次进样循环时间不超过14秒

•自动进样器具有制冷功能，样品瓶容量大100位（2 mL）或者2块微孔板

•最高耐压大于18000 psi

•最大流速5 mL/min

•柱温箱最高温度可达到150 ℃

•可扩展性选择带6块微孔板的高通量自动进器及可选择的检测器

流动相

A: 水（0.1% 甲酸）B: 乙腈（0.1% 甲酸）

色谱柱

Phenomenex Luna C18 2.00×150 mm 3u或相当梯度洗脱 

柱温

40℃

梯度时间表

质谱条件

                     Triple Quad™ 6500

新型的IonDrive™专利技术贯穿多组件，以及新设计的高能检测器HED+，提供超宽的定量线性动态范围，无可比拟的定量分析灵敏度，无与伦比的数据准确性和重现性。可与离子淌度差分技术SelexION™匹配，提高选择性。

离子源

具备电喷雾接口的TurboV™离子源

极性

正离子模式，离子源相关参数如下：

CUR: 20.0

TEM: 450.0

GS1: 60.0

GS2: 60.0

IS: 5500.0

化合物离子对信息如下表所示：

同时检测蜂王浆中4中四环素类抗生素总离子流色谱图：

总结

该方法基于（GB/T23409-2009），使用LC-MS/MS法进行蜂王浆中四环素类抗生素的测定，并且通过验证可用于各种蜂产品基质中四环素的定量、定性分析。数据库经验证适用于SCIEX Triple Quad™ 3500、3200，4000系列、4500系列、API 5000、5500系列以及6500系列的LC-MS/MS系统。灵敏度高，重现性好，适用于各相关实验室进行该类物质的日常分析。

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