鱼肉中9类61种兽药的快速定量检测
来源：SCIEX
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注：可以按照客户需求，定制特定品种、特定浓度、特定溶剂的混标。
在现代化农业生产过程中，鱼肉、鸡肉、猪肉等动物源食品在饲养环节中往往在饲料中使用大量的抗生素来辅助预防和治疗疾病。但是，这些药物的滥用或者不恰当的使用可能会对人体造成潜在的危害。于是，兽药残留的问题也逐渐成为人们普遍关注的社会焦点。
一般情况下，建立兽药定量方法时采用三重四级杆质谱，然而对于前处理简便，基质复杂的情况下，三重四级杆选择性具有一定的局限性，可能会导致检测结果不准确。对于高分辨质谱而言，分子量是准确测量，具有很强的选择性。本文以复杂基质鱼肉为例，采用TripleTOF® 5600+建立了9类61种兽药的快速定量分析方法，对于采用高分辨质谱定量分析常规药物而言具有重要的参考意义。
本方法的特点
1. 实验比较了 SWATH 2.0™ 和 Scheduled MRMHR两种技术在定量分析方面的能力；
2.简单易行的前处理方法很大程度上提高了工作效率；
3.SWATH 2.0™和 Scheduled MRMHR 两种技术的工作流程提供了高分辨，高灵敏和高选择性的定量方法。
前处理方法
a. 取0.5 g（精确到0.01 g）鱼肉于离心管中；
b.加入2 mL乙腈，剧烈震荡5 min，在室温条件下，6000 rmp离心2 min；
c.取上清液，加入2 mL正己烷震荡2 min，静置分层，去掉上层正己烷层，重复去脂一次；
d.上清液用水稀释一倍，然后过0.22 μm滤膜上机测试；
液相条件
色谱柱：PhenomenexKinetex C18，3.0×100 mm，2.6 μm；
流动相: A: H2O（0.1%甲酸），B: Acetonitrile；
流速： 0.4 mL /min；
进样体积：10 μL；
表1 液相梯度条件
质谱条件
扫描方式：TOF MS-SWATH® MS/MSand TOF MSScheduled MRMHR；
TurboV™ ESI离子源参数:
气帘气CUR：25psi；源温度：600 ℃；
雾化气GAS1：55psi；辅助气GAS2：55psi；
DP电压：60 V； CE能量35±15 V；
IS电压：5500V（Positive ）/ 4500 V（Negative）
化合物信息
表2 61种兽药信息
产品号 | 产品名称 | Product Name | CAS# |
1ST5725 | 左氧氟沙星 | Levofloxacine | 100986-85-4 |
1ST5758 | 双氟哌酸 | Difloxacin | 98106-17-3 |
1ST5757 | 沙拉沙星 | Sarafloxacin | 98105-99-8 |
1ST5734 | 那地沙星 | Nadifloxacin | 124858-35-1 |
1ST4107 | 恩诺沙星 | Enrofloxacin | 93106-60-6 |
1ST5759 | 洛美沙星 | Lomefloxacin | 98079-51-7 |
1ST5738 | 诺氟沙星 | Norfloxacin | 70458-96-7 |
1ST5756 | 培氟沙星 | Pefloxacin | 70458-92-3 |
1ST4100 | 达氟沙星 | Danofloxacin | 112398-08-0 |
1ST5753 | 司帕沙星 | Sparfloxacin | 110871-86-8 |
1ST5703 | 环丙沙星 | Ciprofloxacin | 85721-33-1 |
1ST2275 | 群勃龙 | Trenbolone | 10161-33-8 |
1ST2223 | 黄体酮; 孕酮 | Progesterone | 57-83-0 |
| 福莫特罗 | Arformoterol | 67346-49-0 |
1ST2292 | 勃地酮 | Boldenone | 846-48-0 |
1ST2221 | 甲基睾酮 | 17-Methyltestosterone | 58-18-4 |
1ST2220 | 睾丸酮 | Testosterone | 58-22-0 |
1ST2274 | 19-去甲睾丸酮 | Nortestosterone | 434-22-0 |
1ST2286 | 丙酸睾丸素 | Testosterone propionate | 57-85-2 |
1ST8505 | 苯丙酸诺龙 | Nadrolonephenylpropionate | 62-90-8 |
1ST4006 | 磺胺邻二甲氧嘧啶 | Sulfadoxine | 2447-57-6 |
1ST4014 | 磺胺二甲基嘧啶 | Sulfamethazine | 57-68-1 |
1ST4028 | 磺胺喹恶啉 | Sulfaquinoxaline | 59-40-5 |
1ST4005 | 磺胺甲基异噁唑 | Sulfamethoxazole | 723-46-6 |
1ST4034 | 磺胺氯哒嗪 | Sulfachloropyridazine | 80-32-0 |
1ST4010 | 磺胺二甲异噁唑 | Sulfisoxazole | 127-69-5 |
1ST4036 | 磺胺对甲氧嘧啶 | Sulfameter | 651-06-9 |
1ST4042 | 磺胺间二甲氧嘧啶 | Sulfadimethoxine | 122-11-2 |
1ST4040 | 磺胺间甲氧嘧啶 | Sulfamonomethoxine | 1220-83-3 |
1ST4006 | 磺胺邻二甲氧嘧啶 | Sulfadoxine | 2447-57-6 |
1ST4017 | 磺胺嘧啶 | Sulfadiazine | 68-35-9 |
1ST4007 | 磺胺噻唑 | Sulfathiazole | 72-14-0 |
1ST4002 | 磺胺甲基嘧啶 | Sulfamerazine | 127-79-7 |
1ST1301 | 克伦特罗 | Clenbuterol | 37148-27-9 |
1ST1307 | 莱克多巴胺 | Ractopamine | 97825-25-7 |
1ST1324 | 喷布特罗 | Penbutolol | 36507-48-9 |
1ST1304 | 特布他林 | Terbutaline | 23031-25-6 |
1ST1302 | 沙丁胺醇 | Salbutamol | 18559-94-9 |
| 天青A | Azure A | 531-53-3 |
| 天青B | Azure B | 531-55-5 |
| 天青C | Azure C | 531-57-7 |
1ST7916 | 亚甲基蓝 | Methylene Blue trihydrate | 7220-79-3 |
1ST7301 | 孔雀石绿 | Malachite green | 2437-29-8 |
1ST7307 | 结晶紫 | Crystal Violet | 548-62-9 |
1ST7308 | 隐色结晶紫 | Leucocrystal Violet | 603-48-5 |
1ST7303D6 | 隐色孔雀石绿-D6 | Leucomalachite green D6 | 1173021-13-0 |
1ST7301D5 | 孔雀石绿-D5 | Malachite Green-D5 | 1258668-21-1 |
1ST7001 | 氯霉素 | Chloramphenicol | 56-75-7 |
1ST2256 | 醋酸氟氢可的松 | Fludrocortisone 21- acetate | 514-36-3 |
1ST2226 | 氢化可的松 | Hydrocortisone | 50-23-7 |
1ST2218 | 地塞米松 | Dexamethasone | 50-02-2 |
1ST2232 | 倍氯米松 | Beclomethasone | 4419-39-0 |
1ST2230 | 倍他米松 | Betamethasone | 378-44-9 |
1ST2227 | 泼尼松 | Prednisone | 53-03-2 |
1ST2225 | 泼尼松龙 | Prednisolone | 50-24-8 |
1ST7202B | β-玉米赤霉烯醇 | β-Zearalenol | 71030-11-0 |
1ST7203 | 玉米赤霉酮 | Zearalanone | 5975-78-0 |
1ST7202 | α-玉米赤霉烯醇 | α-Zearalenol | 36455-72-8 |
1ST000631 | 玉米赤霉醇 | Zeranol | 55331-29-8 |
1ST7204 | 玉米赤霉烯酮 | Zearalenone | 17924-92-4 |
1ST7201B | β-玉米赤霉醇 | β-Zearalanol | 42422-68-4 |
提取离子色谱图
添加在鱼肉基质中100 ppb的兽药混标，一针进样子离子提取色谱图：
线性范围、准确度、回收率等
基质匹配标准曲线浓度在0.2～200 ng/mL范围内，所有兽药的线性相关系数均大于0.99，线性相关性良好；并且准确度均在89.3% ～114.1%之间；添加5、10、50、50、100 ng/mL回收率均在78.2% ～105.2%之间。
本方法的优势
小结
本实验前处理方法简单易行，很大程度上提高了工作效率；SAWTH™数据绝对响应值比MRMHR大，但是MRMHR的信噪比大，选择性更强；对于SWATH®而言，不需要增加Cycle Time，能保证所有的化合物均采集到高质量的二级质谱图，并且溯源性较强；对于MRMHR而言，必须要预先得到目标物的保留时间，并且需要把目标物的保留时间和质荷比输入到列表中，如果化合物种类较多，工作效率较低，而SWATH®不需要预先输入保留时间和质荷比，对于多残留分析，大大提高了工作效率；本文对于采用高分辨质谱定量分析常规药物而言具有重要的参考意义。
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