超高效液相色谱-串联质谱法测定禽蛋中2种色素残留
作者：杨梅，张姮婕，陈红
( 成都市食品药品检验研究院，四川成都610045)
1方法
1.1加丽素红、加丽素黄含量测定
按照GB/T18970—2003《饲料添加剂10%β,β-胡萝卜素-4，4-二酮(10%斑蝥黄)》及GB/T21516—2008《饲料添加剂10%β-阿朴-8’-胡萝卜素酸乙酯(粉剂)》方法，测定购买的加丽素红、加丽素黄中斑蝥黄和β-阿朴-8’-胡萝卜素酸乙酯的含量。
1.2对照溶液的配制
斑蝥黄对照储备液配制:精密称取斑蝥黄对照品0.01g，加入0.1g BHT，用甲醇-三氯甲烷(9∶1，V/V)溶解并定容至100ml，浓度为100μg/ml，-20℃保存。
斑蝥黄对照系列溶液配制:临用时，取配制的斑蝥黄对照储备液，用含0.1%甲酸的乙腈稀释制成5、20、50、100、200、1000ng/ml的系列溶液。
混合工作对照储备液配制:临用新制。精密称取加丽素红、加丽素黄各0.01g置25ml容量瓶中，加入0.1g BHT，加1ml 60℃水，超声5min后，加15ml甲醇与2ml三氯甲烷，继续超声5min，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.22μm尼龙微孔滤膜，取续滤液即得。斑蝥黄和β-阿朴-8’-胡萝卜素酸乙酯的浓度均为40μg/ml。
混合系列工作对照溶液配制:临用时，取配制的混合工作对照储备液，用含0.1%甲酸的乙腈稀释制成含斑蝥黄和β-阿朴-8’-胡萝卜素酸乙酯分别为5、20、50、100、200、1000ng/ml的系列溶液。
1.3样品前处理
禽蛋去壳后均质，取1.0g样品于50ml离心管中，加入0.1g BHT和1ml丙酮，涡旋30s，加入20ml乙腈，涡旋1min，超声(250W，53kHz) 30min，10000r/min离心5min，取上清液，加10ml乙腈饱和的正己烷涡旋1min，静置分层后弃去上层正己烷层，下层溶液用5g无水硫酸钠脱水后于40℃减压蒸干。取Silica固相萃取柱(200mg，3ml)，用3ml正己烷-丙酮(9∶1，V/V)活化，残渣加2ml正己烷使溶解后将其转至Silica固相萃取柱顶部，收集流出液，用6ml正己烷-丙酮(9∶1，V/V)洗脱，合并流出液，于40℃下氮气吹至近干。用1ml含0.1%甲酸的乙腈溶解残渣，过0.22μm尼龙微孔滤膜，滤液待分析。如样品溶液中目标物含量过高(超出标准曲线范围)，应酌情稀释。
1.4仪器条件

色谱条件:色谱柱:WatersACQUITYUPLCBEHC18色谱柱(2.1mm×50mm，1.7μm);柱温40℃;进样量1μl;流速0.3ml/min;流动相A为0.1%甲酸，流动相B为含0.1%甲酸的乙腈，梯度洗脱条件见表1。在上述色谱条件下，斑蝥黄反式、顺式异构体保留时间分别为1.52、1.72min，β-阿朴-8’-胡萝卜素酸乙酯保留时间为2.28min。斑蝥黄的量以顺、反式异构体总量计。

质谱条件:离子源及扫描方式:电喷雾离子源(ESI)，正离子模式，多反应监测(MＲM);电离电压3.5kV;离子源温度150℃;脱溶剂气温度500℃;脱溶剂气流量550L/h(氮气);锥孔反吹气流量50L/h(氮气);碰撞室压力4.01×10－3mbar(碰撞气为氩气);离子条件见表2。